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[水产微生态] 微生态制剂在水产养殖中的应用研究进展(二)

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kk 发表于 2014-8-25 16:21:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
——摘自《水产饲料科技》

1.5 微生态制剂的使用方法
1.5.1 注射或浸浴生物体
         将微生态制剂直接与动物接触,能在较短时间内刺激动物免疫系统产生反应。这种方法适合于大型动物,而对体型小的动物剂量不好掌握,同时注射造成的损伤会使病原菌有机可乘。此法应注意使用剂量和浓度,剂量适宜才能最大限度地刺激动物的免疫机制。Austin 等[25] 用106cells/mL 和108cells/mL溶藻胶弧菌分别注射和浸浴大西洋鲑,大大降低了杀鲑气单胞菌对鲑的感染率。

         作为饲料添加剂,随同饲料一起进入机体内发生作用。此法目前应用较多,其优点是操作简单、劳动强度小、效果显著。但作为添加剂的微生态制剂,其成分必须具有较好的稳定性和耐受性,要求在饲料制粒过程中不能丧失其生理活性。在使用前即时混合益生菌菌剂和饵料可部分解决这一问题,但所需菌剂量较大且操作不便。Rengpipat 等[26] 在试验中使用益生菌(1012cfu/g) 与饵料的质量比达到3∶1。若能利用基因工程技术得到耐高温的菌株,将从根本上解决饵料制粒过程中益生菌受破坏的问题。

1.5.3 直接加入水环境
         将微生态制剂直接加入养殖池,要注意环境是否适合有益菌的生存和繁殖。如水体加入了抗生素、消毒剂等化学物质,就会降低微生态制剂的作用效果。微生态制剂的加入量须能够保证有益菌成为优势菌,在养殖水体才能发挥最大的作用。因此尽可能的减少换水,如果中间换水和使用消毒剂,应在换水后或使用消毒剂几天后补加首次使用的剂量[27]。同时,应用免疫探针和分子探针等先进技术[28] 对养殖水体和动物肠道细菌区系及益生菌在其中的地位和存活情况进行深入地研究,以确定合适的使用周期和剂量。

1.6 微生态制剂使用的注意事项
1.6.1 针对性
         使用微生态制剂要充分考虑其作用的对象及目的。动物的种类不同,对菌种的要求也不同。水产动物中肉食性鱼消化道内优势菌群为肠微球菌、贝内克菌、胞菌、乳酸菌、弧菌等,而草食性鱼消化道内,还有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌等。不同菌种其作用和效果有差异,比如以净水为目的就选择芽孢杆菌和光和细菌为主的复合制剂;酵母菌可以助消化,当水产动物受到应激或经过药物治疗就可以选用以酵母为主的制剂,制粒时就选择可以耐高温的芽孢杆菌。

1.6.2 时段性
         微生态制剂在动物的整个生长过程都可以使用,但不同的时期其作用效果不尽相同,不同的养殖阶段使用剂量不同[29] :①新生动物肠道内基本是无菌的,体内微生态平衡尚未完全建立,抵抗疾病的能力较弱,此时引入益生菌,可较快地进入体内,占据附着点,效果最佳;②在动物生长后期,肠道功能开始退化,添加微生态制剂可以起到补充、完善肠道有益菌群、保证健康的作用;③应用抗生素后,抗生素经常会降低胃肠道有益菌的数量,添加微生态制剂可以帮助尽快恢复这些有益菌的数量;④在运输、饲料转变、天气突变和饲养环境恶劣等应激条件下,水产动物体内微生态平衡遭到破坏,使用微生态制剂对形成优势种群极为有利。

1.6.3 稳定性
         微生态制剂的稳定性主要指对特定环境的耐受力,如温度、湿度、酸度、机械磨擦和挤压以及室温条件下的存贮时间等;空气中一些微生物会直接污染活菌制剂;日光中的紫外线对微生物细胞有一定杀伤作用;一些营养物质与微生态制剂混合,会显著影响微生物的活性,如不饱和脂肪酸对微生态制剂具有拮抗作用。

1.6.4 禁忌性
         在使用抗生素等药物后,肠道菌群失衡,此时应及时引入微生态制剂,通过其独特的益生作用,使紊乱的肠道菌群平衡得到恢复。但在实际饲料使用与饲养过程中应尽量避免与抗菌中西药物配合应用,以防止由R 因子控制的耐药性菌株的泛滥。投放净水剂后,若频繁换水会使细菌随换水而损失,故应减少换水次数或不换水[30]。

2 微生态制剂在水产养殖中的应用
   微生态制剂在水产养殖业的应用研究,最早见于1986 年的报道[7]。进入20 世纪90 年代,由于其具有广阔的应用前景,有关研究报道与日俱增。通常情况下,微生态制剂作为预防病原菌感染制剂加入饵料中或直接加入养殖环境。已报道的微生态制剂主要包括乳酸细菌、弧菌属、芽孢杆菌属及假单胞菌属,涉及到鱼、虾、蟹、贝和生物饵料的科学研究和实践生产的各个领域中。下面按它在不同养殖种类上的应用简要地作一介绍。

2.1 鱼类养殖中的应用
      鱼类的消化道中含有比周围环境中更多的微生物,多达10^8cells/g[31]。细菌依靠其黏附性定植在鱼的肠黏膜上,鱼体肠道特有的微生物群落是在稚鱼阶段或变态之后建立起来的。为了使益生菌有效地定居于仔鱼的肠道,应在孵化之后尽早加入[32]。
      Austin[25] 发现有一株V. alginolyticus菌株对鱼的致病菌V.ordaliiV.anguillarumAeromonassalmonicidaYersinia ruckeri 表现出拮抗作用,在进一步的人工感染试验中,他们观察到该菌株对大西洋三文鱼(Atlantic salmon) 的益生保护作用,使鱼对A.salmonicidaV.anguillarumV.ordalii的敏感性降低。Gildberg [33] 报道,将含有广布肉杆菌Carnobacteriumdivergens ( 分离于大西洋鳕的消化道) 的冻干饵料投喂鳕鱼幼苗提高了其对鳗弧菌(V.anguillarum)的抗感染能力。Roberson[34] 用含肉杆菌菌株K1 的饵料投喂大西洋鲑(SalmosalarL)、虹鳟(Oncorhynchu smykiss) 的鱼种和鱼苗,然后进行感染试验,结果表明,可减少由杀鲑气单胞菌、病海鱼弧菌(Vibrio ordalii) 和鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri) 引起的疾病,但对鳗弧菌(Vibrio anguillarum ) 无效。Ottesen [35] 报道了大西洋比目鱼(Hippoglossushippoglossus L. ) 鱼卵和幼苗在不同微生物作用下的存活情况。他们将鱼卵和幼苗分别浸泡在含有非致病菌V.salmonicida L.plantarum 或致病菌V.iliopiscariuss p . n o v 的水中,而对照组则按正常的方式进行,过一段时间后再观察它们的存活率。结果表明,与对照组相比( 存活率为58.2%),经过非致病菌V.salmonicida L.plantarum 浸泡的鱼苗,在孵化后第32d 的存活率分别为72.8% 68.4%,而经V.iliopiscarius sp.nov. 浸泡的鱼苗,其存活率仅为41.8%。这表明,使用微生态制剂可以提高幼苗成活率。桂远明等[36] 等用从正常健康鲤鱼的肠道中分离出的无毒正常菌群J Y10J Y31 制成的生态制品喂饲鲤鱼,其增重率、能量同化率、生态生长效率、组织生长效率均高于对照组。
      吴垠等[37] 给杂交鲤投喂由节杆菌(Arthmobactersp. ) 和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei ) 制成的活菌制剂,在低温条件下感染迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda),结果表明,试验组死亡率明显低于对照组。黄永春等[38] 在饲料中添加EM 饲养建鲤,随着添加量的增加(2%、4%、6%),试验组建鲤日增重率分别比对照组提高0.6%、9.2%和16.0%,饵料系数降低1.3%、7.4%和22.9%。张庆等[39] 向罗非鱼养殖水体中添加以芽饱杆菌为主的微生物复合菌剂,能明显改善水质条件,降低氨氮、亚硝酸盐,提高罗非鱼的生长。吕军仪等[40] 在大海马养殖中使用复合细菌,每10d一次,用量5mL/m3,菌液浓度为(2.0 ~ 2.5)×10^9mL^-1,结果表明,应用复合微生物实验组溶解氧比对照组( 不加菌) 提高了32.7%,氨氮、亚硝酸氮和硫化物含量分别降低了76.9%、97.1%、93.3%,同时,试验组的弧菌数量比对照组降低了2 个数量级。

2.2 对虾养殖中的应用
      Maeda[41] 将一株土壤细菌PM-4和硅藻、轮虫一起加入斑节对虾无节幼体的养殖水槽,13d 之后幼体的成活率为57%,而未添加菌的槽中所有的幼体5d之后全部死亡。Austin等[25] 报道,一株从对虾孵化池中分离的细菌(V.alginocyticus) 对减少由Aeromonassalmonicida 和两株病原性弧菌引起的疾病是很有效的。将它应用于万氏对虾孵化池,用浓度为2×10^3cfu/mL的V . parahaemolyticus做浸浴感染试验,96h 后试验组存活率为100%,而对照组全部死亡。Jory[42] 用副溶血弧菌作为有益细菌,能显著促进凡纳对虾(Penaeu svannamei ) 幼体的生长,提高存活率。Moriarty[6] 对如何利用有益生物控制养虾池的病害进行了研究。通过在试验池投入浓度在1×10^4 ~ 1×10^5cells/mL 之间的Bacillus spp. 细菌。后来发现养在该池的虾在160d 存活率很高,而对照池的虾不足80d,已因萤光V i b r i o 病几乎死光,由此表明了利用有益微生物控制虾病发生的可能性。
      Rengpipat 等[43] 分两组进行了90d 的投喂芽孢杆菌S11 培养斑节对虾的试验,测定了其血淋巴的吞噬作用和吞噬指数,结果表明,S11 菌株能有效地激活吞噬作用,增加吞噬活力,S11 处理组的酚氧化酶和抗菌活性更高。第二组是90d 试验之后,接着将虾感染致病发光弧菌哈氏弧菌,感染10d 后处理组的存活率高于未处理组,且处理组的免疫应答更显著,吞噬指数显著增加,这表明,S11 能通过激活虾的细胞和体液免疫以及通过肠道中的竞争排斥而防御疾病。
      Porubcan[44] 曾报道,将硝化细菌接种到养殖斑节对虾的水处理池中,降低了氨和亚硝酸氮的含量,他又报道称,将芽抱杆菌加入到充气装置附近,能大大减少水中的化学耗氧量(COD)。Sugama 和Tsumura[45] 将一种菌BY-9 大量加入到养殖斑节对虾幼体的水体中,结果表明,BY-9 不但减少了哈维氏弧菌(Vibrioha rveyi )的存活密度,而且提高对虾幼体的存活率。
     孙舰军等[46] 把光合细菌拌入饵料投喂中国对虾22d后发现虾体PO、SOD、溶菌和抗菌活力分别比对照组高102.2%、22.1%、53.4% 和14.0%, 血细胞数目高出67.2%。刘淇[47] 用复合型活菌生物净水剂在南美白对虾养殖中的试验表明,养殖水各试验组平均、对照药物组的透明度比空白对照组分别高39.35 %、38.21%,各试验组、对照药物组的化学耗氧量比空白对照组分别低24.59%、17.61%。各试验组和对照药物组的N H4- N平均比空白对照组低33.10%、28.15%,由此可见各试验组和对照药物组均优于空白对照组。

2.3 蟹类养殖中的应用
      Nogami 和Maeda[48] 从海水中分离得到1株细菌P M -4,以10^6cells/mL的浓度应用于蓝蟹育苗中。试验组的存活率为27.2%, 而对照组的存活率仅为6.8%。他们同时指出P M -4 可以抑制鳗弧菌(vibrioangulliarum) 的生长,并且可以抑制育苗池中其他弧菌和产色素菌的生长,还能抑制真菌(Haliohthoris) 的生长。Nogami 和Maeda[48] 还指出,尽管多次往育苗池种添加PM-4,但细菌的浓度始终超不过10^6cells/mL,他们认为是处于快速生长期的幼苗有捕食的习性,一部分细菌被他们捕食掉了,从而使水体中的细菌浓度维持在10^6cells/mL 左右。另一个可能的原因是水体中的营养物质缺乏。Maeda[49] 指出在水产养殖生态系中细菌的浓度不能超过10^6cells/mL,用10^7cells/mL 浓度的细菌接种于无菌海水中,海水中细菌的浓度很少能超过10^7cells/mL,72h 后细菌的浓度开始下降。

2.4 饵料生物养殖中的应用
      Hirata 等[54] 采用以Bacillus spp 为主的混合益生素对轮虫(B.plicatilis ) 生长的影响展开研究,结果同样表明益生素能促进轮虫的生长。Douillet 等[55] 在对轮虫(Brachionus plicatilis、B.rotundiformis ) 的研究中发现,在培养过程中添加Alteromonas 菌株或一株革兰氏阴性菌(B3) 能够提高轮虫的生长速率。Vershuere 等[56,57] 用分离的1 株菌分别对卤虫幼体进行了体内拮抗试验,结果表明,1 株菌可保护卤虫幼体免于解蛋白弧菌Vibrio proteolyticus 的感染,尽管各菌株的作用程度不同,无菌对照组所有的卤虫于感染2d后死亡,而接种了菌株LVS58 或9 株菌的混合物的卤虫,4d 后其存活率超过80%。

3 微生态制剂存在的问题
4 微生态制剂发展的趋势
(待续。。。)
微生态制剂在水产养殖中的应用研究进展(一)http://www.ixumu.com/thread-518111-1-1.html

本帖最后由 cjlittlepig 于 2014-8-25 16:22 编辑

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